Болезнь Ауески (далее - БА) – псевдобешенство. Это остро протекающая болезнь домашних и диких животных, проявляющаяся поражением головного и спинного мозга, воспалением легких, сильным зудом и расчесами в местах проникновения вируса.
Вызывается вирусом, который относится к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae. Основным фактором, определяющим циркулирование и распространение вируса болезни Ауески среди свинопоголовья является его способность переживать в латентной форме даже среди вакцинированных животных. Реактивация вируса происходит под воздействием различных факторов (стрессы, гормональные сдвиги, травмы и пр.) и, вероятно, связана с подавлением Т-клеточного иммунитета.
Клинические признаки БА особенно остро проявляются у поросят. Новорожденные поросята от невакцинированных свиноматок больше других восприимчивы к заражению, этот особый период восприимчивости длится приблизительно до 14 дня их жизни. После инкубационного периода болезни, который длится от 3 до 11 дней, появляются клинические симптомы, которые в течение 12-36 часов приводят к смерти животных. К типичным клиническим признакам можно отнести: повышение температуры тела до >41°С, нарушение координации движений, уединение от других поросят в помете, конвульсии, тремор мышц и характерная афония. Реже отмечается рвота, диарея или удушье. Следует помнить, что у свиней, в отличие от других животных, нет зуда. Смертность достигает 100% у 1-2-х недельных поросят; 50-70% - у старших поросят. У подсвинков 4-12-недельного возраста наблюдаются похожие симптомы, но в менее острой форме.
Свиньи или дикие кабаны являются естественным хозяином, которые остаются латентно инфицированными после клинического выздоровления.
Экономический ущерб при возникновении болезни Ауески обусловлен большим отходом поросят, малой эффективностью при откорме и непригодностью в качестве племенных животных. Заболевание свиноматок приводит к резкому нарушению воспроизводства стада из-за абортов и рождения нежизнеспособных поросят.
Диагноз болезни Ауески устанавливается путем выявления возбудителя (путем выделения вируса или постановки полимеразной цепной реакции - ПЦР), а также путем выявления серологического ответа у живого животного.
Болезнь Ауески необходимо дифференцировать у свиней от болезни Тешена, классической чумы, бешенства, гриппа, репродуктивно-респираторного синдрома, сальмонеллеза, отечной болезни, листериоза, стрептококкоза, гипогликемии, солевого отравления, аскаридоза, авитаминоза.
Болезнь контролируется сдерживанием зараженных стад и использованием вакцин и/или удалением латентно-инфицированных животных.
В настоящее время для борьбы с этой инфекцией широко используются как лиофилизированные – живые вакцины, содержащие аттенуированные штаммы вируса болезни Ауески (ВБА), так и инактивированные.
При этом в РФ до настоящего времени ещё применяются вакцины (живые и инактивированные, моно- и поливалентные), изготовленные из немаркированных вакцинных штаммов, что способствует вирусоносительству из-за невозможности отличить поствакцинальные антитела от антител к дикому латентному вирусу ВБА.
В мировой практике принято проводить вакцинопрофилактику только с использованием маркированных вакцин и дискриминирующих тестов, позволяющих дифференцировать вакцинальный и инфекционный иммунитет. Среди маркированных вакцин наиболее широкое распространение получили gE-негативные вакцины.
ФКП «Щелковский биокомбинат» широко известный в настоящее время на рынке биопрепаратов, как производитель вакцин против болезней свиней, выпустил вакцину против болезни Ауески инактивированную эмульгированную маркированную.
Препарат предназначен для профилактики болезни Ауески у поросят от вакцинированных и невакцинированных свиноматок, ремонтных свинок, свиноматок и хряков в угрожаемых и неблагополучных по данному заболеванию хозяйствах. Включенный в вакцину маркированный gE-негативный штамм позволяет дифференцировать животных, в сыворотках крови, которых имеются поствакцинальные антитела к данному вакцинному штамму от постинфекционных антител к полевому вирусу.
Преимуществом моновалентных вакцин является то, что при иммунизации только одним иммуногеном снижается нагрузка на иммунную систему; повышается качество иммунного ответа; исключается конкуренция между вирусами за среду обитания; предотвращается подавление одним вирусом иммунологического ответа на другой вирус. Тем самым можно использовать различные схемы иммунизации против разных болезней, а это важно потому что оптимальные схемы вакцинации против разных болезней отличаются.
Материалы и методики исследований
В работе использовали маркированный по gE-гликопротеину штамм ВБА с биологической активностью не ниже 8,5±0,5 lg ТЦД50/см3.
Для накопления вирусного материала использовали монослойно-суспензионную линию клеток ВНК-21/13-13. Культуру клеток выращивали при температуре 37,0 ±0,5°С, используя ростовую среду Игла ДМЕМ (рН 7,2) с добавлением 5% заменителя эмбриональной сыворотки крови крупного рогатого скота HyClone. Инфекционную активность вирусного материала определяли методом титрования на микропланшетах по цитопатическому действию (ЦПД).
Титрование вируса проводили на сформированном монослое перевиваемой культуре клеток BSR Т-84. Планшеты помещали в СО2-термостат и выдерживали при температуре 37,0 ±0,5°С в течение 5 суток. Учет ЦПД вируса проводили методом ежедневного микроскопирования монослоя на инвертированном микроскопе Olympus. Результаты титрования ВБА рассчитывали по методу Рида и Менча в модификации Ашмарина и выражали в тканевых цитопатических единицах, вызвавших дегенерацию 50% зараженных клеток (lg ТЦД 50/см3).
Инактивацию вирусосодержащего материала проводили димерэтиленимином. Полноту инактивации проверяли на культуре клеток BSR Т-84 в 3-х последовательных пассажах, оценивая полноту инактивации вируса по наличию или отсутствию ЦПД на культуре клеток.
Для изготовления серий вакцин использовали масляный адъювант на основе множественной эмульсии вода-масло-вода фирмы «SEPPIC» Монтанид ISA-201.
Полученные серии инактивированной эмульгированной маркированной вакцины против БА проверяли по показателям СТО, разработанного на ФКП «Щелковский биокомбинат».
Результаты исследований
Определение антигенной активности компонента вируса БА и тест на наличие или отсутствие маркера по гликопротеинам gE и gВ оценивали после однократной вакцинации по титрам поствакцинальных антител (АТ) в ИФА.
Испытания проводили на клинически здоровых подсвинках не моложе 2-х месяцев, массой не менее 35-40 кг из хозяйств, в которых не проводилась вакцинация против болезни Ауески и благополучных по данной инфекции хозяйств.
Полученные серии вакцины вводили согласно инструкции внутримышечно в области шеи за ухом, соблюдая правила асептики.
У животных проводили забор крови до вакцинации и после вакцинации через 14 и 21 день. Пробы сывороток крови для определения gB-специфических и gE-специфических антител отправляли в экспертную лабораторию для постановки ИФА. Результаты исследований представлены на рисунках: № 1, № 2, № 3, № 4, № 5, № 6.
Рис. № 1 Динамика уровня gB-специфических антител до вакцинации
Рис. № 2 Динамика уровня gB-специфических антител через 14 дней после вакцинации
Рис. № 3 Динамика уровня gB-специфических антител через 21 день после вакцинации
Рис. № 4 Динамика уровня gE-специфических антител до вакцинации
Рис. № 5 Динамика уровня gE-специфических антител через 14 дней после вакцинации
Рис. № 6 Динамика уровня gE-специфических антител через 21 день после вакцинации
Учет результатов наличия антител к гликопротеину gВ и gE проводился тест-системой HerdChek фирмы IDEXX, используя для спектрофотометрии длинну волны 650 нм. Уровень антител выражали показателем S\N (отношение положительной пробы к отрицательному контролю).
При S\N ≤0,6 - результат позитивный (сыворотка имеет антитела к ВБА);
S\N >0,7 – результат негативний (сыворотка имеет антитела к ВБА);
S\N от 0,6 до 0,7- результат сомнительный.
Полученные результаты показали, что вакцинированные животные имеют положительный уровень защитных антител уже через 14 дней после вакцинации, которые постепенно нарастают, достигая максимального значения на 21 день после вакцинации.
По данным исследований видно, что серии вакцины против болезни Ауески инактивированной эмульгированной маркированной иммуногены, а отсутствие антител к gE гликопротеину, при наличии антител к gB гликопротеину, свидетельствует о пост вакцинальном иммунитете, индуцированным наличием маркера по gE-гликопротеину.
Заключение
Таким образом, вакцина против болезни Ауески инактивированная эмульгированная маркированная производства ФКП «Щелковский биокомбинат» авирулентна, иммуногенна. Дает возможность дифференцировать животных, имеющих в сыворотках крови антитела к маркированному вакцинному штамму (по отсутствию антител к гликопротеину gE в 100% случаев), от животных с антителами к полевым штаммам вируса, что может быть очень важным при использовании в программах по контролю и искоренению болезни Ауески.
Лоивская О.Ю., старший микробиолог ФКП «Щелковский биокомбинат»,
Богомолова О.А., кандидат биологических наук, микробиолог ФКП «Щелковский биокомбинат»,
Чумакова Марина Сергеевна, специалист по продвижению ФКП «Щелковский биокомбинат»,
Литенкова И.Ю. кандидат ветеринарных наук, руководитель службы развития ФКП «Щелковский биокомбинат»,
Матвеева И.Н. доктор биологических наук, профессор, руководитель группы культуральных работ ФКП «Щелковский биокомбинат»
